99精品久久99久久久久-99热精品久久只有精品-丰满白嫩人妻中出无码-9色国产深夜内射-午夜理论欧美理论片

新聞中心

News Center

當前位置:首頁新聞中心用PCR識別不同的噬菌體抗體克隆

用PCR識別不同的噬菌體抗體克隆

更新時間:2013-03-05點擊次數:1691

[方法]
1.配制PCR“主混合液”,每克隆20ul PCR混合液, 包含:
● 水,15.5ul
● 10XRT緩沖液,2.0ul
● 5mmol/L dNTP, 1.0ul
● 5,引物,1.0ul
● 3,引物,1.0ul
● Taq聚合酶,0.2ul
如果PCR緩沖液中不含Mg2+,這應加至終濃度為1.5mmol/L。也可以使用與DNA聚合酶配套供應的PCR試劑。
2.取20fLl主混合液加到0.5m1管內,或加入96孔PCR微孔板孔內。
3.用l根牙簽輕輕接觸單個克隆并在PCR反應液中轉動,注意不要轉移太多材料。如在PCR反應液中有過量細菌,會抑制PCR反應。扔掉牙簽;或如有需要,用它在1個單獨的96孔培養孔板內培養基救援該克隆;或者在瓊脂平板上接觸表面。用1~2ul甘油儲存料或主板培養液,也可以代替相應克隆。
4.反應液上鋪上礦物油。
5.用PCR儀格內加熱試管或孔板至94℃,10分鐘。裂解細菌使其釋放模板DNA。然后,以94℃1分鐘、55~60℃1分鐘(對于Fab片段文庫的篩選則為2分鐘)、72℃ 1分鐘的條件孵育,共循環30次。
6.建議在PCR后取5ul PCR反應產物在2%瓊脂糖膠上檢測。這將顯示有多少克隆包含全長的插入序列。
7.PCR后,在礦物油下面加入20ul主混合液,成分如下:
● 乙酰化BSA(10mg/ml), 0.2ul
● BstNⅠ緩沖液(10×),4.0ul
● 水,15.3ul
● BstNⅠ (10U/ul),0.54ul
8.60℃孵育樣本2~3小時。
9.將2ul樣本染液與8ul反應混合物(取自礦物油下面)混合并在4%Nusieve瓊脂糖膠上電泳;此膠用含0.05ug/ml溴化乙錠的0.5倍TBE緩沖液配制。或者是用2.5%瓊脂糖膠電泳(此膠的分辨率較低)。
10.以100V(10V/cm)跑膠并在UV transillu minator上比較各種不同的單獨克隆的帶型。

www.hengdixidi.com

主站蜘蛛池模板: 99riav国产精品视频| 免费看男女做好爽好硬视频| 熟妇视频| 久久精品岛国av一区二区无码| 久久久久久国产精品免费无码| 亚洲欧美激情在线一区| 亚洲乱码国产一区三区| 狠狠色噜噜狠狠狠7777奇米| av片在线播放| 国产成人a∨激情视频厨房| 久久综合九色综合网站| 大地资源网第二页免费观看| 丰满亚洲大尺度无码无码专线| 狠狠躁夜夜躁人人爽天天不卡| 久久人人爽人人爽人人片| 中日韩高清无专码区2021| 欧美又粗又长又爽做受| 精精国产xxxx视频在线| 色窝窝免费一区二区三区| 国产精品永久在线观看| 四虎永久在线精品免费播放| 99热精品国自产拍天天拍| 性欧美牲交xxxxx视频| 国产美女遭强高潮开双腿| 天天摸夜夜添久久精品| 好男人在线社区www资源| 亚洲亚洲人成综合网站图片| 国产乱人伦偷精品视频麻豆| 欧美精欧美乱码一二三四区 | 亚洲欧洲av无码电影在线观看 | 日韩精品免费无码专区| 日本久久久| 无码免费午夜福利片在线| 99久久精品精品6精品精品| 丰满人妻| 国产精品992tv在线观看| 国产欧美日韩亚洲一区二区三区| 成人午夜福利视频镇东影视| 国产精品亲子乱子伦xxxx裸| 日本一区午夜艳熟免费| 四川少妇被弄到高潮|